木板油画168×130 cm来自于路易十三的收藏
精心创作一幅以圣母子和圣安娜为主体，外加小施洗约翰或小羔羊，或后两者同时出现的群像，这构想在达·芬奇生命的最后20年中时常浮现于他的脑海，并最终有至少四幅真人大小的不同版本作品诞生于世：三幅素描草图和一幅彩色油画。卢浮宫收藏的这一幅，1517年在达·芬奇位于克卢城堡的书房内现身，后被红衣主教黎塞留买下，将其献给了国王路易十三。画上的人物形象无疑是从古典艺术中汲取的灵感，不过，为了追求更为强烈的动态效果，达·芬奇放弃了现存于伦敦国家美术馆的那副素描草图所采用的恢弘的构图形式，非但没有使所有人物结合成统一的整体，并且还赋予圣母一个趋向于群像外的坚定的动作，而由圣安娜稳定的造型来平衡构图。达·芬奇亲笔绘制的极为出色的素描稿和其他艺术家对这幅作品的临摹画，使这幅《圣母子与圣安娜》的作者归属不言自明。与画面近景相距甚远的远景体现了达·芬奇对地质学的研究，岩石的层理和运用“空间透视法”成功表现的逐渐消失在空气中的自然风景，均是对达·芬奇原作者身份的有力证明。